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實驗十四 葉綠體色素的提取和分離(必修一P97)
一 實驗原理與方法
1.色素的提取原理：葉綠體中的色素是有機物，不溶于水，易溶于丙酮等有機溶劑中。提取方法：用丙酮、乙醇等能提取色素。
2.色素分離的原理：層析液是一種脂溶性很強的有機溶劑。葉綠體色素在層析液中的溶解度不同，溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快，溶解度低的 隨層析液在濾紙上擴散得慢。分離方法：紙層析法。用毛細吸管在濾紙條的下端沿鉛筆線劃一條濾液細線，待濾液干后再劃一兩次，然后將濾紙條插入層析液中(濾 液細線不能接觸層析液)。分離結(jié)果：濾紙條上從上到下出現(xiàn)四條色素帶：橙黃色(較窄，胡蘿卜素)、黃色(葉黃素)、藍綠色(較寬，葉綠素a)、黃綠色(葉 綠素b)。胡蘿卜素與葉黃素之間距離較大，葉綠素a與葉綠素b之間距離較小。
二 實驗注意事項
1.加SiO2為了研磨得更充分。
2.加CaCO3防止研磨時葉綠素受到破壞。因為葉綠素含鎂，可被細胞液中的有機酸產(chǎn)生的氫代替，形成去鎂葉綠素，CaCO3可中和液泡破壞釋放的有機酸，防止葉綠體被破壞。
3.加無水乙醇是因為葉綠體色素易溶于無水乙醇等有機溶劑。
三 實驗討論： 1.濾紙條上的濾液細線，為什么不能觸及層析液?
答：濾紙條上的濾液細線如觸及層析液，濾紙上的葉綠體色素就會溶解在層析液中，實驗就會失敗。
2.提取和分離葉綠體色素的關(guān)鍵是什么?
答：提取葉綠體色素的關(guān)鍵是：①葉片要新鮮、濃綠;②研磨要迅速、充分;③濾液收集后，要及時用棉塞將試管口塞緊，以免濾液揮發(fā)。分離葉綠體色素的關(guān)鍵是：一是濾液細線要細且直，而且要重復(fù)劃幾次;二是層析液不能沒及濾液線。
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