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實(shí)驗(yàn)八 檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)(必修一P18)
一實(shí)驗(yàn)原理:某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物,產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。
1、可溶性還原糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖)與斐林試劑發(fā)生作用,可生成磚紅色的Cu 2O沉淀。
葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓(磚紅色)+ H 2O,即Cu ( OH ) 2被還原成Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。2、脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)。淀粉遇碘變藍(lán)色。
3、蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用,產(chǎn)生紫色反應(yīng)。(蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵,在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用,產(chǎn)生紫色反應(yīng)。)
二 實(shí)驗(yàn)材料
1、做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn),應(yīng)選含糖高,顏色為白色的植物組織,如蘋果、梨。(因?yàn)榻M織的顏色較淺,易于觀察。)
2、做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選富含脂肪的種子,以花生種子為較好,實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡3~4小時(shí)(也可用蓖麻種子)。
3、做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn),可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、可溶性糖的鑒定
a.應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲(chǔ)存,使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑;斐林試劑很不穩(wěn)定,甲、乙液混合保存時(shí),生成的Cu ( OH ) 2在70~900C下分解成黑色CuO和水;
b. 切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進(jìn)行檢測(cè)。甲、乙液分別加入時(shí)可能會(huì)與組織樣液發(fā)生反應(yīng),無(wú)Cu ( OH ) 2生成。
2、蛋白質(zhì)的鑒定
a. A液和B液也要分開(kāi)配制,儲(chǔ)存。鑒定時(shí)先加A液后加B液;先加NaOH溶液,為Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)境。A、B液混裝或同時(shí)加入,會(huì)導(dǎo)致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。
b、CuSO4溶液不能多加;否則CuSO4的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色。
c. 蛋清要先稀釋;如果稀釋不夠,在實(shí)驗(yàn)中蛋清粘在試管壁,與雙縮脲試劑反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上,使反應(yīng)不容易徹底,并且試管也不易洗干凈。
3、斐林試劑與雙縮脲試劑的區(qū)別:
斐林試劑 |
雙縮脲試劑 |
|
|
0.1g/mlNaOH溶液 |
0.1g/mlNaOH溶液(雙縮脲試劑A) |
0.05g/mlCuSO4溶液 |
0.01g/mlCuSO4溶液(雙縮脲試劑B) |
|
是否混合 |
混合后再滴加 |
先加雙縮脲試劑A后加雙縮脲試劑B |
是否加熱 |
水浴加熱 |
不加熱 |
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